Un primer anticuerpo se inmoviliza en la superficie de los pocillos de la placa microtiter. A continuación se añaden las muestras que contienen el antígeno que quedará atrapado por este primer anticuerpo. Las muestras se retiran y se añade el segundo anticuerpo que se añade al antígeno formando un sandwich. Este segundo anticuerpo tiene una enzima unida que al añadir su sustrato generará un producto coloreado. La intensidad del color del producto será proporcional a la cantidad del antígeno detectado que se cuantifica espectrofotométricamente. Las aplicaciones de los métodos de ELISA dentro del campo agroalimentario y medio ambiente son cada vez más numerosas y variadas, para la detección de toxinas bacterianas (botulismo), hongos (micotoxinas), microorganismos patógenos, detección de adulteraciones, etc. Y en los laboratorios de bioquímica clínica para la medida de inmunoglobulinas, proteínas oncofetales y hormonas como la insulina, estrógenos y gonadotropinacoriónica humana (test de embarazo).